朱越雄（苏州大学水产学院，215151）本文就江苏省吴江市水产养殖中罗氏沼虾苗细菌病控制的药物定性和定量技术进行了探讨。虾苗细菌病的诊断可借助于显微观察，将濒死的虾苗用无菌水反复冲洗体表后，用无菌吸水纸将体表所带水分吸干。用无菌镊子拉开头胸部和腹部，分别涂片，并用结晶紫对涂片作简单染色后，镜检。感染细菌病的虾苗组织涂片中可观察到大量细菌，且细菌形态常一致。同时以水体净度为，在发生细菌性疾病的育苗池水体中，氨氮量和有机物含量往往较高，这有利于化能异养菌的生长，而水产动物病原菌多属此类。当确诊为细菌感染后，即可开展药物的定性和定量试验，以避免滥用药物和由于未及时控制病势发展而贻误时机。

　　1材料与方法2的肉霄蛋白胨琼脂和含鸡全血的琼脂。药物敏感性定性检测用上海市卫生防疫站生产的抗生素药敏纸片，包括四环素、卡那霉素、红霉素、头孢拉定、吡哌酸、痢特灵、强力霉素、青霉素G、麦迪霉素、呋喃妥因、妥布霉素、复方新诺明。

　　药敏纸片法具有快速定性的特点，且结果可靠。敏感药物定量检测选择定性试验中对细菌具高敏感性且价格低廉的四环素和痢特灵。

　　病原细菌分离采用虾苗组织涂布培养法，用镜检涂片相同的方法，分别涂布于肉膏蛋白胨琼脂和含鸡金血的琼脂中，30 *C孵育16hi后，检测血琼脂中溶血现象，同时检测肉膏蛋白胨琼脂中的优势生长菌。如无溶血现象，则尚需检测肉膏蛋白胨琼脂中优势菌的溶血性。本试验中因为无溶血现象发生，因此直接用优势菌进一步划平板纯化后，扩大培养作为菌种，用于药物的定性和定量试验。

　　菌种在进行药敏试验前以肉汤蛋白胨液体培养12hr后，以每皿2004的量接种于平板，并用玻璃涂棒分别从三个方向涂布使均匀分布，置30C放置5min使平板表面干燥，然后每皿贴三片药敏纸片，置30C孵育16hr，观察并记录抑菌圈直径。

　　在五种对菌敏感的药物中选择四环素和痢特灵作为定量试验药物，四环素在酸性溶液中具高溶解度，因此用pH3 0的PSS溶解后，再以pH6.0的PSS稀释，痢特灵直接用蒸馏水溶解并稀释，均配成2mg/ml浓度的原液。取试管若干并编号，按一定的规律加液体培养基其中第1管加1.9ml，其余每管1ml然后在第1管中加抗菌药物原液0.与培养基混匀后吸出1ml至第2管中，同样方法依次倍比稀释药物，至第9管，吸弃1ml.第10管不加药物作为对照；最后每管加入经适当稀释的菌液0.05ml，混匀，置30C孵育16hr肉眼观察结果，以菌液呈清亮状态的试管中抗生素最低含量为最佳抗菌浓度。

　　2结果与分析定性试验中药敏纸片法所得结果如表1.可见在12种抗生素中痢特灵和四环素抑表1定性试验中药敏纸片的抑菌效果抗菌药物抑菌圈直径（mm）四环素卡那霉素红霉素头孢拉定吡哌酸痢特灵强力霉素青霉素G麦迪霉素呋喃妥因妥布霉素复方新诺明菌效果最好，而青霉素G、麦迪霉素和复方新诺明对病原菌无抑制作用，即该菌对上述三种药物具耐药性。在痢特灵和四环素中可确定一种为定量试验药物，但一般为提高生产应用中的保险系数，常采用二种药物同时使用的方法。

　　四环素和痢特灵的定量试验结果见表2.其中四环素和痢特灵浓度分别达到50%/ml和25/ml时，菌液呈清亮状态，菌的生长被完全抑制。而在四环素和痢特灵的浓度分别为25g/ml和125g/ml时，虽然细菌仍可生长，但其生长已受到明显抑制。因此，在生产应用中可选择四环素用药浓度在40~50g/ml，痢特灵用药浓度在15~25Mg/ml之间。以上述选用浓度将两种药物同时使用可收到良好的防治效果。

　　表2四环素和痢特灵的定量试验结果试管号1抗生素含量（g/ml）1m四环素一液透明度痢特灵一一+注：一为清亮，+为微混池，++为较混浊，+++为很混浊。

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