MTX对人口底癌HSC-2细胞生长及细胞超微结构的影晌1材料与方法1.1细胞系及细胞培养人口底鳞癌细胞系HSC-2，由第四军医大学口腔医学院细胞生物教研室提供。在37°C9（C2）= 5及饱和湿度条件下，含体积分数9=15的小牛血清的RPMI1640（GIBCO）培养液中培养1.2药物磁导向甲氨蝶呤缓释药物FM-MTX，是通过化学磁导向甲氨蝶呤缓释药物（简称FM-MTX）是通过化学交联制得的磁性甲氨蝶呤白蛋白缓释针剂〔〕它具有明显的抗肿瘤作用，能抑制舌癌Tca8113细胞从G期进入S期，使S期进展延缓，从而导致Gi期比例增加，并出现细胞凋亡〔〕体内治疗，通过外加磁场的靶向定位，对裸鼠移植瘤有明显的抑制作用〔〕本实验通过药物作用不同时间细胞电镜切片，观察FM-国家自然科学基金资助项目39070871国家新药基金资助项目93-；62）-N-t2 ri.分装后：备用‘用完全培养液稀释释。

　　1.3FM-MTX对HSC-2细胞系细胞增殖的影响取生长旺盛的HSC-2口底癌细胞接种于96孔板，同时种6块板，培养24h后，加药FM-MTX及游离MTX，并设立加外磁场（M+）和不加外磁场（M-）对照及空白对照组。药物质量浓度为100rg/L，每组设立4个平行孔L分别在加药后第1，2，3，4，5，6a各取一块培养板加入MTTPBS溶液，采用MTT法检测各孔光吸收值A490以时间为横座标，以相对光吸收值A490为枞座标分别绘出4种细胞在FM-MTX及MTX两种药物作用下的生长曲线方法见〔4〕4FM-MTX进入瘤细胞后超微结构观察HSC-2口底癌细胞传至中号培养瓶6瓶，培养24h后，取5瓶，每瓶加入FM-MTXl00yg/L，继续培养，分别于14244872h收获细胞，透射电镜观察FM-MTX药物颗粒进入瘤细胞的内在化过程。

　　2结果1FM-MTX对人口底癌HSC-2细胞增殖的影响MTX法每天检测FM-MTX及游离MTX在加外磁场（M+）不加外磁场（M-）持续作用16d时，人口底癌HSC-2细胞的增殖状况如所示从图中可以看出，从第3d起FM-MTX及MTX已表现出明显的细胞抑制作用，随着时间增加，抑制作用加强22透射电镜观察对照组HSC-2细胞连接紧密，桥粒、半桥粒结构较多。加入FM-MTX药物组，1h后，透射电镜下可见瘤细胞内溶酶体大量增生，胞浆内分泌小泡较多。溶酶体内尚未见到FM颗粒的沉积（）多数细胞核呈椭圆形，部分核出现较规则的肾形。药物处理4h后可见溶酶体内有吞噬的FM超微磁粒；瘤细胞胞浆线粒体肿胀、增多，内质网扩张，胞浆糖原颗粒增多（）24h则见溶酶体明显增大，FM颗粒增多（）48h溶酶体膜裂解，胞浆内可见磁微粒（）线粒体肿胀明显，内摄磁性颗粒线粒体膜裂解，内质网断裂（）72h后磁微粒释放于胞浆外（）细胞连接稀松，桥粒、半桥粒结构少见细胞体积缩小。

　　3讨论癌细胞的一个重要特征是不断增殖对癌细胞增殖的抑制效果是鉴定癌细胞诱导分化的一个重要指标本实验观察到磁导向甲氨蝶呤缓释药物FM-MTXl00，ug/L对人口底癌HSC-2细胞生长有明显的抑制作甩药物作用48h后瘤细胞生长明显抑制，并随着药物作用时间延长，对细胞生长的抑制乍用增强超微结构观察到，HSC-2细胞经100Mg/L的FM-MTX药物处理后，多数细胞核呈椭圆形，部分核出现较规则的肾形，这说明100Mg/L的FM-MTX可使HSC-2细胞向单核细胞系分化药物作用后胞浆线粒体肿胀，缺嵴，内质网扩张、断裂，细胞连接结构减少，胞浆分泌小泡减少。说明100g/L的FM-MTX即可降低HSC-2细胞的分泌能力Song等在对内质网进行系统研究发现，内质网为合成分泌性蛋白质和酶类的主要细胞器，与细胞的侵袭力密切相关我们观察到瘤细胞的内质网扩张断裂、推断药物作用可减小细胞的侵袭能力。

　　我们通过药物作用后不同时间点的超微结构观察，明确了胞浆溶酶体为磁性微粒的摄取和代谢靶药物作用1h溶酶体大量增生；4h后可见溶酶体内有吞噬的FM超微磁粒；24h则见溶酶体明显增大，吞噬的FM颗粒增多；48h溶酶体膜裂解，胞浆内可见磁微粒；72h后磁微粒释放于胞浆外其具体作用机理仍需进一步研究