化疗药物药敏试验方法研究进展刘珊玲综述，彭芝兰审校华西医科大学附属第医院妇产科，成都610041不同肿瘤对化疗药物的反应不同。如何更有效地用药，大程度减少副作用，是临床和实验研究者致力探索的问种肿瘤的临床用药指导，取得了定效果。寻找与临床相关性好敏感易标准化快速简易的方法，是药敏试验研究的方向。

　　1体外药敏试验肿瘤干细胞。油体外培养可，殖形成克隆，克隆形成率或抑制率可反应肿瘤对药物的敏感程度1此法为经典方法。但本身有较大的局限性。需要细胞量大。约510的病例因标本量不够而实验失败；克隆形成的难易程度受细胞类型影响大。可评价率常低于50；耗时费力。克隆计数不易标准化；界6，1等121认为药敏试验应基于药物对细胞总数的杀伤情况预测化疗效展。

　　为减少细胞用量，提高可评率，人0等13提出了毛细管培养法，可评率提高到77.但增加了操作难度。临床应用尚少，难以评估。

　　1.2放射性标记核酸前体掺入法风，0核酸合成的下降是细胞受损导致增殖功能完整性丧失体进入，似的比率来反应，该法的优点是费时短，所需标本量小，成功率达90.判断指标客观，临床上对敏感性的预测为4570.但对抗药性的预测大于90.故该法曾被认为主要用于耐药性测定。

　　由于，殖速度低的肿瘤往往对药物具有耐药性而生长迅速的肿瘤则对化疗有较好反应，故该法存在下述缺点，肿瘤增殖周期中。只有510细胞正在进行咖人合成，测量的仅为这部分细胞；标记前体进入细胞可能因分离操作致细胞受损而停止，而0的修补往往发生在暴露于化学药物数小时或几天之后，该法不能反应此结果；核酸前体进入的是肿瘤和非肿瘤细胞混合物，短期内正常细胞也可能有繁殖。要影响测定结果。

　　目前在方法学上己有了些改进。如将细胞种植于软琼脂板，抑制非肿瘤细胞生长并延长培养时间等，可将敏活细胞具有将染色物质排除的能力，可通过固绿将死细胞着色。检测药物的细胞毒性。观察终点为细胞溶解检测1包括大量非增殖细胞在内的整个肿瘤细胞群体的细胞溶解情况，此法在临床抗药机制与体外观察抗药机制致的情况下适用，如足叶乙甙和多聚他，核糖引起的细胞的溶解。

　　但氟脲嘧啶作用是抑制胸腺嘧啶合成酶的活性。而不是直接引起细胞溶解因而检测结果可能与临床不符141.，80法是血液肿瘤药敏试验中被广泛认可的方法。可评价率约77.敏感性74，特异性93.但在实体瘤中应用较少。

　　灭光细胞印迹试验1.5，1巧。0人具有完整细胞膜的活细胞与单醋酸根荧光素结合后，经水解作用。生成荧光素。细胞发出荧光。

　　该法以微器官为试验对象，培养体系可使实体瘤存活1个月以上。可评率为7395.如组织大于200mg则成功率可为100.对卵巢癌和乳腺癌，临床预测准确率85.715此法保留了细胞间相互作用及组织的立体结构，与体内情况更接近。但由于没有完全分离的未经药物处理的细胞作正常对照，很难区分细胞是因药物作用死还是由于在培养条件下不能维持生存活性。技术难度大，推广较难。1.5氮唑1比色法细胞线粒体中脱氢酶将黄色的肌134，2 512七咖1；1们，1叫代谢为深蓝色的甲月8晶体，0肘30溶解晶体后。570腕波长测量，值并判断结果。

　　近年来。肘去在几乎所有类型肿瘤药敏试验中应用，其可评率高简易快速观察终点客观。138等报道在白血病中预测准确率87.5；陈心秋等报道在卵巢癌中。短期内体内外符合率大于888971法也有多种改如用软拟胎培串。减少常细胞生长；于溶液中加入0琥珀酸钠。使检测敏感性提高5倍。等等，尽管目前俦法是研究热点，它仍存在下列缺点易受酶活性，值细胞离子浓度。细胞周期改变等的影口向，此外。形成的甲品体了在数小时内铠色。并受到活刹080吣1的。响。达些邰可影晌准确性感街镨镨揠，筐碰亨0墟遂扭翻，趾端描汾神卿6.啤而过细胞死时，人1不再生成并迅速分解消失，因此可由花量来反应活细胞数。人1的量则通过检测其与荧光素荧光素酶复合物反应后生成光子的量获得。

　　这方法重复性好，成功率可达9096，其大大降低了药敏试验对细胞的需求量。据已有研宄结果，该法与临床相关性较好。在卵巢癌和乳腺癌中。敏感性为该法临床前瞻性研宄仍不足，其有待进步研宄结果评价。

　　17其它方法观察经药物作用后细胞核损伤的形态学变化。与药物幡育48小时后的细胞制成涂片，经姬姆萨染色。于显微镜下将发生核碎裂。核固缩及其他退行性变的细胞数与对照组比较。判定药物是否有效。据报道此法成功率为1临床符合率94，与放射性标记核酸前体掺入法的符合率80.缺点是观察终点要求有经验的病理学家，且费时耗力，指标不够客观。

　　1.7.2总蛋白染色法8染料由静电作用与细胞生物大分子中氨基酸结合显蓝色。其564，波长处4值与细胞数呈良好线性关系。细胞生长情况及活性由整个培养基质中蛋白质含量确定。此法简单。快速，结果受环境因素影响d.目前这方法用于新药筛选，尚未在新鲜肿瘤标本中进行过药敏试验。

　　活细胞中水解酶可将双醋酸根荧光素水解为焚光素。

　　发出焚光，测定荧光的强度可反映培养体系中活细胞的数目。该法在96孔培养板中进行。可自动检测，快速简便。

　　判断指标客观。在卵巢癌药敏试验中。该法与，30法相关较好，与临床疗效也有很好的相关性痔疮套扎器21.

　　1.7.4流式细胞术分析，71於冲了人8.

　　利用流式细胞术检测发生细胞凋的细胞数以及逃脱调细胞中1人损伤的程度，该法检测出细胞经药物作用后良好线性的剂量效应关系，可以测得药物的协同作用。

　　被认为能用于白血病和淋巴瘤的药敏试验中31.

　　5核仁组成区嗜银蛋白检测技术知况爪核仁组成区嗜银蛋白含量作为核仁组成区及其入转录活动的指标，可用来反映抗癌药物对肿瘤细胞作用后的变化。其优点是检测终点没有非肿瘤细胞的干扰，缺点在于观察计数嗜银蛋白颗粒较费时耗力，结果变异较大41.

　　在，388鼠白血病细胞中，鸟氨酸脱羧酶活性的抑制与药物浓度有相关性。并随药物种类的不同而不同；在人上皮性癌细胞中，鸟氦酸脱羧酶活性的抑制与细胞生长的抑制有关。因此，这方法被认为可用于药敏试验9.

　　1.7.7蛋白检测，抗肿瘤药物可改变，53蛋白达水平。且朽3基因的调节可能与肿瘤细胞对药物的敏感性或耐药性有关，在细胞株研宄中发现在抗癌药有效的细胞中。野生型，53蛋白蛋白达。由此认为，53蛋白的不同达情况可能作为药敏试验指标其他报道的方法尚有如免疫组化技术糖蛋白检测等。均不够成熟。

　　2活体内药敏试验体外药敏试验虽有各自的优点，但不能反映药物在体内的作用情况。如药物的代谢剂量，肿瘤的血管形成等因素。而体内药敏试验异种移植法则更接近人体反应，临床意义较大。目前主要用的实验模型有下列几种2裸小鼠由于丁淋巴细胞的缺乏人体肿瘤能在其体内生长。经移植后的人体肿瘤生物学特性稳定。能保持原有预测抗药准确性可达97，预测药物敏感准确性92171由于裸鼠饲养过程中肿瘤体积增大。须再移植传代。药敏试验要在几代中进行。36个月方可得到结果；加之只有3的移植瘤可连续传几代。因此这方法并不能用临床常规药敏试验。而常用于新邦测试，肿瘤植入正常或免疫缺陷小鼠肾包膜下。在其发生免疫排斥之前即可获得实验结果。观察终点是测量肿块两顶端直径以评估肿瘤体积与移植第天体积相比较。如结合其他指标如组织学检查。有丝分裂活性流式细胞术检测以及肿瘤重量。肿瘤增殖曲线的变化等，则结果更为可靠。该法应用以来己在临床上获得了较为满意的效Ml18I 2.3重症联合免疫缺陷小鼠模型！。，3，小鼠无1功能的淋细胞也无！淋巴细胞。

　　由于其细胞活性低，加之极低的抗体浓度和淋巴细胞数研宄供体肿瘤淋巴细胞情况更容易。人免疫球蛋白的产生可以作为测定指标。由于这种小鼠极易感染病菌，词养和操作都应在相对无菌条件下进行，故在临床上的应用尚少叫。

　　纵观现有的众多药敏试验方法。总的发展趋势是寻找出对总体肿瘤细胞杀伤状况能作出评估成功率高预测准确易标准化快速简便重复性好，与临床相关性好参考文献转第189页0把。参与急性期反应。促进冠状动脉血栓的形成促进中性粒细胞的粘附过程，加重损伤细胞等多种因素有关131.

　　测的结果看。制1中期患者血清几60即阳性率高于人肘1早期和晚期患者户，5，另外。动态观察1例娜1患者胸痛后16和0即水平，发现随着，肘8的升高，16和0即的水平也随之增加，且16的峰值比0即的峰值出现早。随着病情缓解又逐渐降低。

　　12347913；火明。几6和阶与的疾祸发生过程密切相关，观察几6和0即的水平对，1的诊断病情监测和预后估计有重要的参考。至于儿6升高的原因及参与胗1病理过程的确切机制，尚需对1时各组织细胞几6受体数量及细胞因子系整体协调作用等方面进行研宄，以上接第192页7陈心秋，唐东平，等。1法在妇科恶性肿瘤体外药敏试验中的临床应用。现代妇产科进展，1996517.

　　期更好地为临床估计病情判断预后治疗等提供新的证据；杨林编发14范洵楠谢器浩。心0在急性白血病体外药物敏感性测定中的应用。江苏医药，1996；22杨林编发