临床药物色谱具有分离和分析的双重功能,因而被广泛应用于临床药物的分析,药物的临床标本主要有血血浆血清全血尿唾液及各种组织,其特点为:被测组分含量极微而采样量受到限制,大体积样品会带来灾难性的杂质干扰;干扰杂质含童高而且成分复杂;被测物质常出现同系物形式,或者为系列代谢产物。在进入色谱系统前要对样品进行预处理,除去干扰物质和对色谱系统具有致命性损害的脏物质。在这方面药物工作者进行了大童的实践,总结来说有以下几种方法。
蛋白质沉淀法这是较为简单的种血样处理方法,往样品中加入定童与水互溶的有机溶剂,使蛋白质面失去水化层相互聚集而产生沉淀析出,再经离心除蛋白,若灵敏度足够,可取上清液直接进样,否则将上清液浓缩后进样,由于药物与血浆蛋白结合,难以直接用来提取,蛋白质沉淀法常常做为其他处理方法的前处理方法,往往再进步利用柱切换等方法,对样品中的药物进行提取或富集。常用的蛋白质沉淀剂有有机试剂甲醉乙醉乙腈氯仿和,甲烷,酸碱,醋酸高,酸次氯酸氢氧化钡,无机盐硫酸盐钨酸盐。究竟用赛种沉淀剂,应根据所测定的样品而定。并不拘泥于上述的几种。在用有机试剂沉淀的同时,也可根据需要加入缓冲溶液,调节合适的值,或者用两种以上的沉淀剂,以使蛋白质沉淀更完全。有报道蛋白质沉淀会降低回收率。延长离心时间可以提回收率。关于蛋白质沉淀剂的用量问般为样品的24倍,大剂量的沉淀剂虽使蛋白质沉淀更完全,但会稀释样品,蛋白质沉淀法操作简便,是基础的血样处理方法。
液液提取法这,是经典的样品处理方法,根据分配定律原理,往生物样品中加人有机溶剂进行萃取,萃取后,再将含有待测样品的提取溶剂放置在适宜的萃取容器内,用气流吹干,后用少置的流动相溶解。其方法的关键在于提取溶剂的选择。有时步提取,如果成分复杂,则要进行多步提取。对于理想的提驭毒且沸点不高;与水不相溶;适当的蒸发性;化学隐定性高,无相互作用;不易乳化;重要的是对被提取物质有高度的选择性,以获取高的提取率。在实际应用中,我们选择萃取溶剂的原则,对于极性大的组分用强极性溶剂提取,反之亦然。常用的提取溶剂有,甲烷仿己烷叔丁基甲醚乙醚异丁醇乙酸乙酯庚烷苯等。
为了调整萃取溶剂的极性,常常使用混合溶剂萃取。
